产品货号：
MT2001
中文名称：
热启动DNA聚合酶(杂质耐受型)
英文名称：
HotStart BAPA3G DNA Polymerase
产品规格：
250U
发货周期：
1～3天
产品价格：
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HotStart BAPA3G DNA Polymerase为第三代DNA聚合酶，具有5'-3'外切酶活性，不具有3'-5'外切酶活性，其具有最高的杂质耐受性（对乙醇、胍盐、肝素具有极高的耐受性），因此对于纯度较差的DNA模板，该酶仍然可以获得理想的实验结果。
本制品为化学法修饰的HotStart DNA聚合酶，其在50℃以下100%无活性，只有95℃条件下加热5min后才能完全恢复酶的活力。因此该系统可以有效抑制非特异性PCR扩增，极大的提高了PCR扩增特异性和灵敏度。该酶配有独特的反应缓冲液，可在宽范围中得到良好的扩增结果、检测灵敏度更高、信号更强。
- 快速扩增：具有6kb/min的扩增能力，1kb片段可在25min内完成扩增.
- 杂质高耐受性：全血、血清、培养细胞、尿液等样本直接进行PCR扩增，无需核酸纯化。
- 高特异性：采用独特的热启动技术，50℃以下无活性，仅有95℃加热5min才能恢复酶活。
BAPA3G DNA聚合酶对抑制物耐受性：
| SDS | 0.01% | 胍盐 | 0.25% |
| 乙醇 | 5% | 全血 | 15% |
| 肝素 | 0.1IU/ml | 血清 | 15% |
| Trizol | 0.5% | 血浆 | 2% |
| 血红蛋白 | 30μM | 尿液 | 5% |
一个活力单位即在在74℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。
| 组分 | 规格 |
| HotStart BAPA3G DNA Polymerase(5U/μL) | 50μL |
| 5×HotStart BAPA3G Buffer(with Mg2+) | 1.5mL×2 |
保存：-20℃，避光，有效期2年。
- 1×HotStart BAPA3G Buffer中含有1.5mM Mg2+，必要时可自行调整。
- HotStart BAPA3G DNA Polymerase (5U/μL)中含有40%浓度甘油，使用时应小心吸取。
50μL体积建议添加的样品量：
| 抗凝全血 | 2.5μL | 培养细胞 | ＞100个 |
| 血清 | 2.5μL | 组织 | 0.1mg |
| 尿液 | 2.5μL | 毛发囊 | 1～3个 |
| 血浆 | 1μL | gDNA | 1～400ng |
| 植物叶片 | 2mm | cDNA | 1～400ng |
| 植物粗提物 | 2～4μL | 质粒 | 0.1～10ng |
- 反应体系：
按照如下组分配制20μL PCR反应体系：成分 用量 终浓度 5×HotStart BAPA3G Buffer 4μL 1× HotStart BAPA3G Polymerase (5U/μl) 0.1μL 25mU/μL dNTP Mixture (10mM each) 0.4μL 200μM PCR Forward Primer(10μM) 0.2～0.4μL 100～200nM PCR Reverse Primer(10μM) 0.2～0.4μL 100～200nM DNA模板 X μL - ddH2O 至20μL - - 在PCR反应体系中HotStart BAPA3G DNA Polymerase的用量可在25-50 mU/μL进行调整。
- 基因组DNA模版用量在1ng～1μg，质粒和病毒DNA模版用量在1pg～10ng。
- 在PCR反应体系中HotStart BAPA3G DNA Polymerase的用量可在25-50 mU/μL进行调整。
- 扩增程序：
- qPCR扩增程序用两步法：
步骤 温度 时间 循环数 Stage 1 95℃ 5min 1 Stage 2 95℃ 10s 25～40 - 该酶为化学修饰的热启动BAPA3G DNA聚合酶，必须95℃加热5min才能恢复活性，该热启动步骤不能缩短时间。
- 常规PCR三步法程序：
步骤 温度 时间 循环数 Stage 1 95℃ 5min 1 Stage 2 95℃ 10s 25～40 50～60℃（退火） 10s 72℃ 2kb/min Stage 3 72℃ 2min 1 - 该酶为化学修饰的热启动BAPA3G DNA聚合酶，必须95℃加热5min才能恢复活性，该热启动步骤不能缩短时间。
- qPCR扩增程序用两步法：
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